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貨號 B-P-00001

規(guī)格 10mg、20mg 、50mg、100mg

保存條件 4℃、2年

應(yīng)用

Biozellen® Collagen I 是二維環(huán)境中表面薄涂層的理想選擇； 它促進(jìn)各種細(xì)胞類型的細(xì)胞粘附，例如肝細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、脊髓神經(jīng)節(jié)、肌肉細(xì)胞、雪旺氏細(xì)胞、上皮細(xì)胞； 涂層膠原蛋白 I 可用于研究腫瘤細(xì)胞的侵襲、遷移和巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞的趨化性。

膠原 I 3D 凝膠類似于動(dòng)物細(xì)胞外基質(zhì) 在 3D 體外配置中的培養(yǎng)，與2D培養(yǎng)不同的是3D培養(yǎng)可以提供仿生物微環(huán)境可以操縱凝膠強(qiáng)度來影響 3D 培養(yǎng)中的細(xì)胞遷移；允許您研究 ECM 的變化對細(xì)胞發(fā)育、趨化性、遷移和形態(tài)的影響。

注意

膠原蛋白產(chǎn)品在操作與制備過程中，需保持無菌環(huán)境。

建議膠原蛋白與其他配制溶液要預(yù)先進(jìn)行預(yù)冷，操作過程中在冰上進(jìn)行制備。

涂覆程序

注意：使用這些建議作為指導(dǎo)，以確定您的培養(yǎng)系統(tǒng)的最佳包被條件。

1. 如果需要，將所需體積的膠原蛋白溶液從瓶子中轉(zhuǎn)移到稀釋容器中。 使用無菌 0.01 N HCl 溶液進(jìn)一步稀釋至所需濃度。

2.溫和搖動(dòng)膠原混合物直至材料*混勻。

3.將稀釋的膠原材料添加到培養(yǎng)表面，確保整個(gè)表面都被覆蓋。 （建議：5 μg/cm2）

4.室溫孵育，蓋上蓋子，1小時(shí)。

5. 孵育后，吸出所有剩余材料，直至表面干燥。

6.用無菌培養(yǎng)基或1X PBS仔細(xì)沖洗涂層表面，避免刮傷表面。

7.涂層表面準(zhǔn)備好即可使用； 可以在 2-8°C無菌條件下儲存長達(dá)一周。

一般的 3-D 凝膠制備程序

注意：I 型膠原蛋白凝膠的特性取決于制備過程中的多種因素，例如溫度、pH 值和膠原蛋白濃度。

1. 將無菌 10X PBS、無菌 1N NaOH、無菌 dH2O、Biozellen® Collagen I 和無菌試管置于冰上。

2.確定最終體積和最終膠原蛋白濃度。 （建議濃度：0.5 - 3mg/ml）

3.計(jì)算如下：

4.執(zhí)行以下步驟：

(a) 在試管中加入 10X PBS。

(b) 在 10X PBS 中加入 1N NaOH 調(diào)節(jié) pH 值。

(c) 將 dH2O 添加到 10X PBS/1N NaOH 中以匹配最終體積，混合復(fù)合物并置于冰中。

(d) 將 Biozellen®Collagen I 加入試管中，*混合無氣泡并置于冰上直至準(zhǔn)備使用。

5.凝膠，將溶液無菌轉(zhuǎn)移到細(xì)胞培養(yǎng)裝置中，放入37℃培養(yǎng)箱30 分鐘。

含有培養(yǎng)基的 3-D 凝膠制備程序

對于使用培養(yǎng)基的 3D 凝膠系統(tǒng)進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，建議使用以下方案。

1. 將無菌 10X 培養(yǎng)基、無菌 1N NaOH、Biozellen® Collagen I、無菌 1X 培養(yǎng)基（含或不含細(xì)胞）和無菌試管置于冰上。

2. 選擇性添加，如果10X 培養(yǎng)基中的成分不包含 NaHCO3， 則應(yīng)另外添加無菌的 NaHCO3 緩沖液（依據(jù) 10X 培養(yǎng)基操作步驟），并放在冰上。

3.確定最終體積和最終膠原蛋白濃度。 （建議濃度：0.5 - 3mg/ml）

4. 確定 3D 凝膠中的最終細(xì)胞濃度。 （建議：105 ~ 107 個(gè)細(xì)胞/毫升）

5.使用以下公式計(jì)算內(nèi)容物的體積。

6.執(zhí)行以下步驟：

(a) 將 10X 培養(yǎng)基加入管中。

(b) 在同一管中加入 1N NaOH。

(c) 如果不含 NaHCO3，則添加額外的緩沖液。

(d) 將計(jì)算過體積的Biozellen® Collagen I膠原蛋白加入試管中充分混合，不 要產(chǎn)生氣泡，并將其放在冰上直至準(zhǔn)備使用。 (注意： 請盡快使用含有膠原蛋白的混合物，因?yàn)閺?5 分鐘左右部分凝膠開始凝固。)

(e)將含有懸浮細(xì)胞的 1x 培養(yǎng)基添加至裝有上述溶液的試管中，并置于冰上。

7.為了膠盡快凝固，請將裝有上述溶液的試管轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱，并在 37℃, 5% CO2 的培養(yǎng)箱中放置 30 分鐘。

計(jì)算公式：