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感受態細胞產品找上海創凌生物
更新時間:2020-08-28   點擊次數:1811次

感受態細胞產品目前在市場上的需求量很大,上海創凌生物生產研發的感受態細胞,一直受到廣大老師的好評。 在電擊感受態方面,擁有了大腸桿菌和農桿菌電擊感受態種類,提高了客戶在轉基因以及文庫構建方面的成功率。目前我公司已與多家科研院所以及公司企業展開合作交流。
 

感受態細胞概念

感受態細胞(competent cell):理化方法誘導細胞,吸收周圍環境中的DNA分子,使其處于適攝取和容納外來DNA的生理狀態。

主要原理就是通過處理使細胞的通透性變大,直觀的說,使得細胞膜表面出現一些孔洞,便于外源基因或載體進入感受態細胞。由于細胞膜的流動性,這種孔洞會被細胞自身所修復。

制作方法

CaCl2

1.將快速生長的大腸桿菌置于經低溫(0℃)預處理的低滲氯化鈣溶液中,便會造成細胞膨脹,同時Ca2+會使細胞膜磷脂雙分子層形成液晶結構,促使細胞外膜與內膜間隙中的部分核酸酶解離開來,離開所在區域,誘導細胞成為感受態細胞

細胞壁通透性發生變化,極易與外源DNA相粘附并在細胞表面形成抗脫氧核糖核酸酶的羥基-磷酸鈣復合物。

聯合其它的二價金屬離子(如MnCo)、DMSO或還原劑等物質處理細菌,則可使轉化率提高1001000倍。

2.此時,將該體系轉移到42℃下做短暫的熱刺激(90s),細胞膜的液晶結構會發生劇烈擾動,并隨機出現許多間隙,外源DNA就可能被細胞吸收。進入細胞的外源DNA分子通過復制、表達,實現遺傳信息的轉移,使受體細胞出現新的遺傳性狀。

3.將轉化后的細胞在選擇性培養基上培養,篩選出帶有外源DNA分子的陽性克隆。

電轉法

電擊法不需要預先誘導細菌的感受態,依靠短暫的電擊,促使DNA進入細菌,轉化率能達到109~1010轉化子/ug閉環DNA。因操作簡便,愈來愈為人們所接受

意義

將構建好的載體轉入感受態細胞進行表達,不僅可以檢驗重組載體是否構建成功,主要的是感受態細胞作為重組載體的宿主可以進行后續實驗,如蛋白質表達純化等工作。

 

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